TECNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR Cohen 9, 594
Para identificar los patógenos endodónticos se han utilizado varios métodos basados en la biología molecular y en un futuro cercano es de esperar el desarrollo de nuevas técnicas. Muchas metodologías moleculares se basan en el empleo del gen del ARN ribosómico (ADNr) para identificar microorganismos sin necesidad de cultivos. El gen 165-ADNr está presente en todas las bacterias; tiene regiones que son virtualmente idénticas en todas las bacterias (regiones conservadas) y otras regiones cuyas secuencias varían de una especie a otra (regiones variables). Las secuencias variables del gen 165-ADNr son las únicas marcas que permiten identificaciones específicas.
Métodos de hibridación ADN-ADN
Los métodos de hibidación ADN-ADN utilizan sondas de ADN. En este proceso, se localizan segmentos de ADN de una sola hebra marcados y se unen a las secuencias de su ácido nucleico complementario; una vez lavados, la aparición de marcas de unión indica la presencia de secuencia de ADN diana. La sonda de ADN puede hacer diana en todo en ADN genómico o en genes individuales (por ejemplo, el 165-ADNr)
Método de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, Polymerasa Chain Reaction)
Los métodos empleados con más frecuencia en las identificaciones microbianas son los de la PCR y sus variantes. El método PCR consiste en la replicación in vitro del ADN, conocida a veces como método de "xerografía genética". Para conseguir muchas copias de una región específica de ADN se aplican ciclos repetidos de calentamiento y enfriamiento.
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