IMPACTO DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN LA PRÁCTICA CLÍNICA ENDODÓNTICA Fouad 2 ed,2017, pag.103
Los métodos moleculares han confirmado y reforzado la asociación de muchas especies bacterianas cultivables con la periodontitis apical y han revelado, también, nuevos patógenos endodónticos sospechosos. La lista de candidatos patógenos se ha expandido para incluir especies de difícil cultivo o bacterias todavía no cultivadas que nunca habían sido encontradas en infecciones endodónticas por enfoques de cultivo. El impacto de estudios de biología molecular en endodoncia es de alta significación en términos de descifrar la diversidad microbiológica de las infecciones endodónticas.
Aproximadamente 500 diferentes especies microbianas (la mayoría bacterias), han sido detectadas en diferentes tipos de infecciones endodónticas. De éstas alrededor del 45% han sido exclusivamente reportadas por estudios de biología molecular, comparados con las 32% detectadas solo por estudios con cultivos. El porcentaje de especies detectadas por ambos métodos está cerca del 33%. Como consecuencia, se vuelve evidente que la microbiota endodóntica ha sido refinada y redefinida por los métodos moleculares.
Una contribución adicional significativa de los métodos moleculares al conocimiento de las infecciones endodónticas viene de los análisis del perfilado comunitario bacteriano. Utilizando métodos que facilitan una perspectiva de la estructura comunitaria (riqueza y abundancia, tales como las tecnologías DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis), T-RFLP (terminal restriction fragment length polymorphism), and NGS (Next-Generation DNA Sequencing). Estos estudios han aportado nuevas percepciones con diferente perspectiva en la etiología y patogénesis de la periodontitis apical, con el foco variando del concepto de "patógeno singular" al concepto de "una comunidad como patógeno". De esta forma, la comunidad es la unidad de patogenicidad y varios factores influyen su virulencia, con énfasis especial en la presencia de ciertas especies patogénicas, sus interacciones múltiples en un consorcio de multiespecies y la acumulación de factores de virulencia en el biofilm. Se ha demostrado que los perfiles comunitarios bacterianos parecen seguir algunos patrones de diferentes presentaciones clínicas de la periodontitis apical.
Los resultados más interesantes de los análisis de perfiles comunitarios en el microbioma endodóntica pueden ser resumidos en los siguientes:
- Los diferentes tipos de infecciones endodónticas han confirmado estar compuestas de comunidades bacterianas multi-especies. Esto también aplica a las infecciones intrarradiculares secundarias persistentes asociadas con dientes tratados y enfermedades post-tratamiento.
- Existe una gran variabilidad ínter-individual en la diversidad de las comunidades bacterianas endodónticas asociadas con la misma enfermedad clínica. El hecho de que la composición del microbioma endodóntico difiera consistentemente entre individuos de la misma enfermedad indica una etiología heterogénea de la periodontitis apical, donde las combinaciones de múltiples especies pueden dar lugar a resultados de enfermedades similares.
- A pesar de la hetereogenidad ínter-individual, las comunidades bacterianas parecen seguir un patrón específico de acuerdo a la condición clínica. Por ejemplo, las comunidades bacterianas endodónticas asociadas con las lesiones sintomáticas son más similares unas y otras cuando son comparadas con comunidades presentes en dientes con lesiones asintomáticas. Por lo tanto, la severidad de la enfermedad (intensidad de signos y síntomas) o la repuesta al tratamiento puede estar relacionada a la composición de la comunidad bacteriana.
- Parece haber un patrón relacionado con la geografía en los perfiles comunitarios. La variabilidad ínter-individual es menor entre individuos que residen en el mismo lugar geográfico cuando se le compara con aquellos observados en individuos que viven en países distantes.
- La porción apical de la raíz albergan un microbioma que es significativamente diferente en composición que el se encuentra en aspectos más coronales del conducto radicular. Las bacterias apicales son tan diversas como las que ocurren en los tercios medio o coronal. Una variabilidad alta se observa en ambas ínter-individuales (muestras de la misma región del conducto radicular pero en diferentes pacientes) y comparaciones nitra-individuales (muestras de de diferentes regiones del conducto radicular del mismo diente).
| Ventajas y limitaciones de los métodos de biología molecular Cohen's Pathways of the Pulp. 12th.ed.2021,Cap.15. pag.597 |
| Ventajas |
Limitaciones |
| 1. Detecta tanto las especies o cepas cultivables como las todavía no cultivables |
1. La mayoría de ensayos son cualitativos o semi cuantitativos |
| 2. Alta especificidad e identificación exacta de cepas con comportamiento fenotípico ambiguo |
2. La mayoría de ensayos sólo detectan una especie o muy pocas especies a un tiempo |
| 3. Detecta especies directamente en muestras clínicas |
3. La mayoría de ensayos detectan sólo las especies a que apuntan y yerran en detectar especies no esperadas |
| 4. Alta sensibilidad |
4. Algunos ensayos pueden resultar laboriosos y muy costosos |
| 5. Rapidez. La mayor parte de los ensayos toman entre minutos y pocas horas para identificar una especie microbiana |
5. Sesgos en PCR de amplio espectro debidos a procedimientos de homogenización, amplificación preferencial de DNA y extracción diferencial de DNA |
| 6. No requiere condiciones anaeróbicas cuidadosamente controladas en la toma de la muestra, transportación y manipulación |
6. Ensayos de hibridación utilizando sondas genómicas que detecten sólo especies cultivables |
| 7. Puede ser utilizada durante el tratamiento antimicrobiano |
7. Puede ser muy oneroso |
| 8. Las muestras pueden ser congeladas para un análisis posterior |
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| 9. El DNA puede ser transportado entre laboratorios fácilmente |
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| 10. Puede detectar microorganismos muertos |
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